電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)。ECLI 是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定以后的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。電化學(xué)發(fā)光法源于電化學(xué)法和化學(xué)發(fā)光法，而ECLI 是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物，是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光二個(gè)過(guò)程。ECL 不僅可以應(yīng)用于所有的免疫測(cè)定，而且還可用于DNA／RNA探針檢測(cè)。

電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)原理

電化學(xué)反應(yīng)過(guò)程：在工作電極上(陽(yáng)極)加一定的電壓能量作用下，二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]2+ 釋放電子發(fā)生氧化反應(yīng)而成為三價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 3+ ，同時(shí)，電極表面的TPA也釋放電子發(fā)生氧化反應(yīng)而成為陽(yáng)離子自由基 TPA+ ，并迅速自發(fā)脫去一個(gè)質(zhì)子而形成三丙胺自由基 TPA·，這樣，在反應(yīng)體系中就存在具有強(qiáng)氧化性的三價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 和具有強(qiáng)還原性的三丙胺自由基 TPA·。

1、化學(xué)發(fā)光過(guò)程：具有強(qiáng)氧化性的三價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 和具有強(qiáng)還原性的三丙胺自由基 TPA· 發(fā)生氧化還原反應(yīng)，結(jié)果使三價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]3+ 還原成激發(fā)態(tài)的二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+ ，其能量來(lái)源于三價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 3+ 與三丙胺自由基 TPA· 之間的電勢(shì)差，激發(fā)態(tài) [Ru(bpy) 3 ] 2+ 以熒光機(jī)制衰變并以釋放出一個(gè)波長(zhǎng)為 62Onm 光子的方式釋放能量，而成為基態(tài)的 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 。

2、循環(huán)過(guò)程：上述化學(xué)發(fā)光過(guò)程后，反應(yīng)體系中仍存在二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 和三丙胺(TPA)，使得電極表面的電化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光過(guò)程可以繼續(xù)進(jìn)行，這樣，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程可以循環(huán)進(jìn)行。

通過(guò)上述的循環(huán)過(guò)程，測(cè)定信號(hào)不斷的放大，從而使檢測(cè)靈敏度大大提高，所以 ECL 測(cè)定具有高靈敏的特點(diǎn)。

電化學(xué)發(fā)光免疫原理

上述的電化學(xué)發(fā)光過(guò)程產(chǎn)生的光信號(hào)的強(qiáng)度與二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 的濃度成線性關(guān)系。

將二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+  與免疫反應(yīng)體系中的一種物質(zhì)結(jié)合，經(jīng)免疫反應(yīng)、分離后，檢測(cè)免疫反應(yīng)體系中剩余二價(jià)的三氯聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 經(jīng)上述過(guò)程后所發(fā)出的光，即可得知待檢物的濃度。